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在ELISA實驗過程中時常會出現復測現象即我們時常說的"花板"現象，這種現象影響檢驗結果的正確判讀，對工作造成一定的不利影響，一旦出現“花板"，實驗結果必須放棄，重新進行，不僅浪費物料和時間，而且還會出現樣本量缺少、交叉污染、報告延遲等一系列問題。影響因素分析如下：一、標本因素正確處理標本，防止大規模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭，防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測，但血清的分離應在抽血后等血液wan全凝固后再離心。二、試劑因素正確保存及使用有效試劑。使用過期試劑及...

在分子生物學和基因研究領域，質量和濃度是DNA和RNA樣本分析的重要參數。因此，為了確保實驗結果的準確性和重復性，并且避免一些不必要的錯誤或偏差，研究人員需要進行DNA和RNA樣本的準確測定和質量控制。其中，POD（Picodrop）測試盒是一種簡單易用、高靈敏度和高精度的測試工具。測試盒是一種基于端光學技術的微量樣品測試系統，可以快速、準確地測定DNA和RNA樣品的質量和濃度。其特色在于，它使用一種先進的平板式窄視角水滴成像技術，可以測定樣品體積范圍在0.5-2μL之間，濃...

大分子抗原因其具有兩個以上的抗原決定簇，而可用雙抗體夾心法測定，小分子半抗原如di高辛、茶堿等藥物以及T3，T4及睪酮等激素因其只有一個抗原決定簇，從而無法使用雙抗夾心方法測定，只能采用競爭抑制法測定。具體步驟如下：1．先用抗小分子的特異抗體如雙抗體夾心法一樣包被固相并封閉。2．同時加入待測樣本和酶標的小分子，溫育一定時間后洗板；此步中，待測樣本的小分子將與酶標小分子競爭與固相上特異抗體結合。3．加入酶底物，溫育顯色測定，顯色的強弱與待測樣本中的小分子含量成反比。這種測定模式...

ELISA測定的陽性判斷值,通常是將大量陰性和陽性人群的測定數據進行統計分析后確定的,其確定依據為判斷結果的假陽性和假陰性率低。在陽性判斷值周圍一定范圍內之外的測定結果可歸為可疑,亦即ELISA測定的“灰區"。“灰區"的大小可用統計學方法確定。測定結果處于“灰區"的樣本,可通過確認試驗或追蹤檢測來確定到底是陽性還是陰性ELISA“灰區"是把定量分析的正常值范圍引入定性分析而建立的概念。灰區的設置有二種:(1)CO×(1±C),C為該試劑的批內C(一般在15%～2...

每一盒ELISA試劑盒里面都有一份對應的說明書，而每一份說明書里都會有寫樣本和稀釋液的稀釋比例，為什么樣本都需要稀釋呢?今天的文章中，將為您分析：為何ELISA實驗血清樣本都需要稀釋?在ELISA試劑盒實驗血清為什么要稀釋？有兩個原因：1）競爭抑制比較明顯，應稀釋競爭物；2）以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現出來。血清稀釋用普通的PBS即可，可加1％的BSA，能有效降低ELISA本底，當然如果你嫌麻煩我覺得用生理鹽水替代PBS關系也不大。不管你是用直接競爭還是...

在ELISA試劑盒中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:（1）固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。...

熒光定量PCR試劑盒的操作步驟：1、取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其溶解。2、兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。3、RNA沉淀將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10...

在ELISA試劑盒中通常有三次加樣步聚，即加標本，加酶聯絡物，加底物。凍住血清融解后，蛋白質局部濃縮，散布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強烈振動。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只需待血清天然凝聚、縮短后即可取得。ELISA試劑盒也可在板孔中參與稀釋液，然后在微型轟動器上轟動1分鐘以bao證混和。通常說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超越一星期測定的需低溫冰存。可用作ELISA試劑盒測定的標本十分廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾...

大分子抗原因其具有兩個以上的抗原決定簇，而可用雙抗體夾心法測定，小分子半抗原如di高辛、茶堿等藥物以及T3，T4及睪酮等激素因其只有一個抗原決定簇，從而無法使用雙抗夾心方法測定，只能采用競爭抑制法測定。具體步驟如下：1．先用抗小分子的特異抗體如雙抗體夾心法一樣包被固相并封閉。2．同時加入待測樣本和酶標的小分子，溫育一定時間后洗板；此步中，待測樣本的小分子將與酶標小分子競爭與固相上特異抗體結合。3．加入酶底物，溫育顯色測定，顯色的強弱與待測樣本中的小分子含量成反比。這種測定模式...

在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。ELISA試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會，只有近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程，因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如...